رنگ آمیزی AGNORS

مواد مورد نیاز:

۱-نیترات نقره

۲-پودرژلاتین

۳-اسید فرمیک غلیظ

۴-آب مقطرسه بارتقطیرشده

۵-اتانل

——————————————————————-

طرز تهیه محلول رنگ آمیزی AGNORS

۱- ۵۰ گرم نیترات نقره را در ۱۰۰ میلی لیترآب مقطر حل می کنیم.

۲- ۲ گرم پودرژلاتین را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر با حرارت ملایم حل کرده و سپس یک میلی لیتراسید فرمیک غلیظ به آن اضافه می کنیم.

۳- ۱۰۰ میلی لیتر از محلول شماره یک را با ۵۰ میلی لیتر از محلول شماره ۲ مخلوط کرده و بلافاصله روی اسلاید ها میریزیم.

——————————————————————-

روش رنگ آمیزی

۱- تهیه برشهای بافتی به ضخامت ۳-۴ میکرون از بلوکهای پارافینی.

۲- دپارافینه کردن لامها درگزیلل.

۳- هیدراته کردن لامها توسط محلول اتانل وآب مقطر.

۴- اضافه کردن محلول رنگ آمیزی Agnors تازه تهیه شده بر روی لامها.

۵- انکوباسیون لامها به مدت ۴۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه.

۶- شستشو با آب مقطر.

۷- آبگیری به ترتیب در الکل ۷۰ درجه و ۹۰ درجه و الکل مطلق به مدت دو دقیقه.

خشک کردن درهوا.

توجه: تمام ظروفی که جهت رنگ آمیزی استفاده می شود می بایست کاملا تمیز بوده و پس از شستشو با اسید با آب مقطر ۳ بار تقطیر آبکشی شوند.

——————————————————————-

روش ارزیابی

پس از رنگ آمیزی نواحی   NORS بصورت نقاط سیاه مشخص داخل هسته ای نمایان می شوند و هسته ها رنگ قهوه ای روشن بخود می گیرند.

اسلاید ها توسط میکروسکوپ نوری با درشت نمایی (۱۰۰۰) با روغن ایمرسیون مطالعه می شوند.

در هر نمونه تعداد ۱۰۰ اپی تلیال غددی بطور مجاورتی و دور انتخاب و از نظر پارامترهای زیرمورد مطالعه قرارگرفتند.

الف) تعداد متوسط نقاط رنگ گرفته با نقره درهسته.

ب) مرفولوژی و اندازه نقاط رنگ گرفته با نقره (ازنظرسایز و Regularity)

تذکر: در این مطالعه سایزمناطق Agnors نسبت به سایز پلاک ۲ تا ۴ میکرومتر سنجیده شده است. بطوریکه لکه هایی با سایز کمتر از ۲ میکرومتر معادل کوچک (Small) و مناطقی به اندازه بزرگتر از ۴ میکرومتر معدل بزرگ (Large) و در بین این دو و متوسط (Medium) در نظر گرفته شده است.