روش رنگ آمیزی IHC

روش رنگ آمیزی IHC

برای رنگ آمیزی به روش IHC مراحل زیر باید انجام شود :

۱٫ ابتدا برش ۳ میکرون از بافت می گیریم. ( بیست دقیقه داخل فور ۸۰ درجه قرار می دهیم)

۲٫ لامها را داخل گزیلل به مدت ۷ دقیقه میگذاریم.

۳٫ بعدا لامها را داخل الکل ۷۰ درصد به مدت ۵ دقیقه قرار می دهیم.

۴٫ سپس لامها را داخل الکل ۹۶ درصد به مدت ۵ دقیقه قرار میدهیم.

۵٫ و در آخر به مدت ۵ دقیقه در الکل ۱۰۰ قرار دهیم.

۶٫ PBS

۷٫ لامها داخل رتریوال به مدت ۵_۷ دقیقه با درجه ۹۰۰ وات ماکروفرتابافر به جوش آمده سپس به مدت ۳۵_۴۵ دقیقه داخل رتریوال تا خنک شود.

۸٫ لامها را به مدت ۵ دقیقه با آب مقطر شستشو می دهیم.

۹٫ blocking آب اکسیژنه به مدت ۷ – ۱۰ دقیقه.

۱۰٫ با آب مقطر ۵ دقیقه شستشو می دهیم.

۱۱٫ به مدت ۵ دقیقه با PBS شستشو می دهیم.

۱۲٫ آنتی بادی مورد نظر به مدت ۳۵_۴۵ روی بافت مورد نظر قرار می دهیم.

۱۳٫ به مدت ۵ دقیقه با Wash Buffer شستشو می دهیم.

۱۴٫ به مدت ۵ دقیقه با PBS شستشو می دهیم.

۱۵٫ آنتی بادی ثانویه به مدت ۳۰ دقیقه روی بافت قرار می دهیم.

۱۶٫ به مدت ۵ دقیقه با Wash Buffer شستشو می دهیم.

۱۷٫ به مدت ۵ دقیقه با PBS شستشو می دهیم.

۱۸٫ به مدت ۵ تا ۷ دقیقه با محلول DAB .

۱۹٫ با آب مقطر ۵ دقیقه شستشو می دهیم.

۲۰٫ هماتوکسیلین به مدت ۲ دقیقه.

۲۱٫ با آب مقطر ۱ تا ۲ دقیقه شستشو می دهیم.

۲۲٫ آبگیری ، شفاف کردن ، لامل زدن. نتیجه : سلول های مورد نظر قهوه ای