رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس

محلول های لازم:

• بافر PBS با PH=7/6
•  آنتی بادی منوکلونال کونژوکه با FITC
• Evans Blue
• محلول مونته
• آّب مقطر
• گلیسیرین

مواد لازم: 

• اتاقک مرطوب
• لام شارژی
• سمپلر

طرز تهیه بافر PBS:

یک قرص را در ۱۰۰ سی سی آب مقطر حل کرده و بعد حجم آن را به ۱۰۰۰ سی سی می رسانیم.

طرز تهیه Evans Blue:

ابتدا ۱ گرم از پودر را در ۱۰۰ سی سی آب مقطر حل کرده سپس ۱ قطره از محلول فوق را در ۲٫۵ سی سی PBS حل می کنیم.

طرز تهیه محلول مونته: 

مخلوطی از گلیسرین و آب مقطر به نسبت یک به نه ( ۹ سی سی گلیسیرین + ۱ سی سی آب مقطر )

روش رنگ آمیزی مستقیم (DIF):

1. تهیه برشهای نازک ۲ تا ۴ میکرون از بافت فروزن شده.
2. علامت گذاری با قلم داکوپن روی سلاید.
3. ریختن محلول حاصل از رقیق کردن آنتی بادی های کونژوکه روی بافت ها.

روش تهیه آنتی بادی ها ی رقیق شده طبق جدول زیر بر اساس نوع آنتی بادی میباشد.

۴٫ پس از ریختن محلول آنتی بادی رقیق شده روی بافتها در اتاق مرطوب قرار داده به مدت ۳۰-۴۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه.

۵٫ آنتی بادی ها را از روی اسلاید ها خالی کرده با PBS شستشو می دهیم، سه بار هر بار ۵ دقیقه.

۶٫ اسلاید ها را در دمای اتاق خشک می کنیم.

۷٫ مونته کردن.

۸٫ دیدن از زیر میکروسکوپ.

روش غیر مستقیم:

1. تهیه برشهای نازک ۲ تا ۴ میکرون از بافت سالم فروزن شده.
2. تهیه سرم از خون بیمار
3. علامت گذاری با قلم داکوپن.
4. ریختن سرم بیمار روی ۵ لام ( پوست نرمال )
5. پس از ریختن سرم روی بافت سالم آنرا در اتاقک مرطوب به مدت ۳۰ تا ۴۵ دقیقه در دمای ۳۷ درجه قرار می دهیم.
6. سرم را از روی لامها خالی کرده و با PBS شستشو می دهیم سه بار هر بار ۵ دقیقه.
7. پس از خشک شدن در دمای اتاق مراحل روش مستفیم را انجام می دهیم.

قابل توجه تمامی مراحل در اتاق تاریک یا با نور قرمز انجام شود.

نتیجه: سیتوپلاسم ===== صورتی روشن

قسمتهای رنگ شده ==== سبز درخشان

زمینه لام ========== آبی