محتویات کیت :
۱) یک عدد پلیت دارای ۹۶عدد چاهک پوشش داده شده با آنتی بادی منوکلونال ضد ۴HE .
۲) محلول اسی بافر ( Buffer Assay (: یک ویال ۱۲ میلی لیتری حاوی محلول جهت رقیق کردن نمونه ها (آماده برای مصرف – آبی رنگ) .
۳) محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme (: یک ویال ۱۲ میلی لیتری حاوی محلول آنتی بادی ضد ۴HE متصل شده به آنزیم پراکسیداز (آماده برای مصرف-
۴) سری استانداردها (Set Standards (: شامل ۶ ویال از استاندارد با غلظتهای صفر ‚ ۲۵‚ ۱۰۰ ‚ ۲۰۰ ‚ ۴۰۰ و ۸۰۰ L/pmol از ۴HE) استاندارد صفر حاوی ۲ میلی قرمز رنگ) .
لیتر و سایر استانداردها حاوی ۱ میلی لیتر می باشند) (آماده برای مصرف – بنفش رنگ) .
۵) سرم کنترل پایین (Serum Control Low (: یک ویال ۱ میلی لیتری سرم انسانی حاوی مقدار مشخص ۴HE رقیق شده در محلول بافری دارای پروتئین به عنوان
پایدار کننده و %۰/۰۵ کاتن به عنوان ماده محافظ (آماده برای مصرف – زرد رنگ) . غلظت دقیق کنترل روی ویال ذکر شده است .
۶) سرم کنترل بالا (Serum Control High (: یک ویال ۱ میلی لیتری سرم انسانی حاوی مقدار مشخص ۴HE رقیق شده در محلول بافری دارای پروتئین به عنوان
پایدار کننده و %۰/۰۵ کاتن به عنوان ماده محافظ (آماده برای مصرف – قرمز رنگ) . غلظت دقیق کنترل روی ویال ذکر شده است .
۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen (: یک ویال ۱۲ میلی لیتری حاوی تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه (آماده برای مصرف- بی رنگ)
۸) محلول شستشو (Buffer Wash (: یک ویال ۵۰ میلی لیتری حاوی محلول شستشوی غلیظ (x20 (دارای محلول بافر فسفات و %۰/۰۵ توئین ۲۰ ، جهت تهیه محلول
شستشوی آماده مصرف ، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت۲۰ ۱/ رقیق نمایید .
۹) محلول متوقف کننده (Solution Stop (: یک ویال ۱۲ میلی لیتری حاوی اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۱۰) یک عدد برچسب مخصوص پلیت .
۱۱) دستورالعمل مصرف
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) ممکن است در محلول شستشوی غلیظ کریستال تشکیل شود که این امر مشکلی را ایجاد نمی نماید . قبل از تهیه محلول شستشوی کار ، برای حل شدن کریستالها ، ویال را
در ۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید . محلول شستشو را به نسبت ۱/۲۰ به میزان مورد نیاز با آب مقطر رقیق نمایید ؛ این محلول (آماده مصرف) به مدت یک هفته در شرایط
-۸ ۲ درجه سانتیگراد قابل نگهداری و مصرف می باشد .
مراحل انجام آزمایش :
۲) ۲۰ میکرولیتر از هر استاندارد، سرم کنترل و نمونه را به داخل هر چاهک بریزید ، پیشنهاد می گردد که از استانداردها و نمونه ها بصورت داپلیکیت استفاده شود بدین معنی ۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب کرده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
که هر استاندارد و نمونه را در دو چاهک بریزید و در انتها از میانگین جذب نوری آنها برای محاسبه نتایج استفاده کنید . استانداردها، سرم های کنترل و نمونه ها را طبق دستور
زیر در چاهک ها بریزید ؛
شش چاهک اول برای استانداردهای مختلف ، دو چاهک بعدی به ترتیب برای سرم کنترل پایین و بالا و سایر چاهک ها را برای نمونه ها استفاده کنید.
۳) ۱۰۰ میکرولیتر از محلول اسی بافر (Buffer Assay (را به هر چاهک اضافه نموده و پلیت را به آرامی به مدت ۱۵ ثانیه تکان دهید تا محتویات آن بخوبی مخلوط شوند
درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق (۲۸ – ۲۲ درجه سانتی گراد) انکوبه نمایید .
۴) محتویات چاهک ها را خالی کرده و چاهک ها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید . برای شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان از
سمپلر ۸ کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد . در هر
دفعه شستشو حدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات شستشو ، چاهک ها را
در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
۵) ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme (آماده مصرف را به داخل چاهک ها بریزید ؛ پس از پوشاندن چاهک ها توسط برچسب مخصوص پلیت،
چاهکها را به مدت ۳۰ دقیقه در دمای اتاق (۲۲-۲۸ درجه سانتی گراد) انکوبه نمایید .
۶) محتویات چاهک ها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید ( همانند بند ۴ ) .
۷) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen ( به هر چاهک اضافه نمایید ؛ چاهک ها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی قرار دهید .
۸) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده (Solution Stop (به هر چاهک ، واکنش های آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر چاهک از
دستگاه الایزا ریدر با فیلتر nm 450 استفاده نموده و جذب نوری چاهک ها را قرائت نمائید . توصیه می شود از فیلتر nm 630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد .
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.