محتویات کیت :
۱) پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی ژنهای pylori.H) plate coated pylori.H).
۲) محلول رقیق کننده نمونه (Diluent Sample (: دو ویال هر یک حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول جهت رقیق کردن نمونه ها
۳) محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme (: یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر آنتی بادی ضد IgG انسانی متصل شده به آنزیم پراکسیداز (آماده مصرف) .
۴) سری استاندارد (set Standards (: 6 ویال استاندارد شامل غلظت های ،۰ ۵ ، ۱۰ ۲۰، ، ۵۰ و۱۰۰ ml/U از آنتی بادی ضد هلیکوباکترپیلوری از نوع IgG) هر ویال
استاندارد حاوی ۱/۵ میلی لیتر می باشد) .
۵) سرم کنترل های بالا و پایین : دو ویال هر یک حاوی ۱/۵ میلی لیتر سرم کنترل با غلظت مشخص درج شده بر روی برچسب هر ویال .
۶) محلول شستشو : یک ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ ( X20 (. جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت آنتی بادی IgM علیه Pylori.H .
۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen (: یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر (آماده مصرف) .
۸) محلول متوقف کننده (Solution Stop (: یک ویال حاوی ۱۲میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۹) برچسب مخصوص پلیت
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) محلول شستشوی آماده مصرف که به نسبت ۱/۱۰ رقیق شده باشد به مدت یک هفته در شرایط ۸ – ۲ درجه سانتی گراد قابل نگهداری و مصرف می باشد .
مراحل انجام آزمایش:
۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب کرده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
۲) ۱۰۰ میکرولیتر از کنترل ها و ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه های آماده شده را طبق دستور زیر در چاهک ها بریزید؛ دو چاهک اول را برای بلانک و کنترل مثبت در نظر بگیرید
. کنترل منفی را به صورت دوپلیکیت ریخته و سایر چاهک ها را برای نمونه ها استفاده کنید؛ پس از پوشاندن چاهکها توسـط برچسـب مخصـوص پلیـت ، چاهکهـا را بـرای
مدت۳۰ دقیقه در دمای۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید .
۳) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید. برای شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان از
سمپلر ۸ کاناله و یا سرنگ استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش
گردد . در هر دفعه شستشو حدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات
شستشو ، چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
۴) ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه آماده مصرف را به داخل چاهکها به استثنای چاهک بلانک بریزید؛ پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت ،
چاهکها را به مدت ۳۰ دقیقه در دمای۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید .
۵) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (همانند بند ۳) .
۶) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate – Chromogen (به همه چاهکها اضافه نمایید؛ چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی قرار دهید .
۷) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده (Solution Stop (به هر چاهک ، واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید؛ برای سنجش جذب نوری هر چاهک از
دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نموده و جذب نوری چاهکها را قرائت نمایید. توصیه میشود از فیلتر nm630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد .
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.