محتویات کیت :
۱) پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهک های پوشش داده شده با آنتی ژنهای سطحی باکتری Brucella) SLPS ).
۲) محلول رقیق کننده نمونه (Diluent Sample (: 1 ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول جهت رقیق کردن نمونه ها .
۳) محلول اسی بافر (Buffer Assay (: 1 ویال حاوی ۷/۵ میلی لیتر محلول IgG human Anti جهت مهار کردن روماتویید فاکتور و غلظتهای بالای IgG در نمونه ها
۴) محلول آنزیم کنژوگه آماده مصرف (Conjugate Enzyme (: یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر آنتی بادی ضد IgM انسانی متصل شده به آنزیم پراکسیداز .
۵) سرم کنترل مثبت (Control Positive (: یک ویال حاوی ۱/۵ میلی لیتر محلول بافری، دارای پروتئین به عنوان پایدار کننده و ۰/۰۵ کاتن به عنوان ماده محافظ و
سرم انسانی غیر فعال شده ، حاوی آنتی بادی IgM علیه Brucella .
۶) سرم کنترل منفی (Control Negative (: یک ویال حاوی ۲ میلی لیتر محلول دارای بافر فسفات و %۰/۰۵ کاتن به عنوان ماده محافظ و سرم انسانی منفی از نظر
آنتی بادیIgM علیه Brucella .
۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen (: 1 ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه (آماده برای مصرف) .
۸) محلول شستشو (Buffer Wash (: دو ویال حاوی۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X10 (دارای محلول بافر فسفات و %۰/۰۵ توئین . جهت تهیه محلول
شستشوی آماده مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت ۱/۱۰ رقیق نمایید
۹) محلول متوقف کننده (Solution Stop (: یک ویال حاوی ۱۲میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۱۰) برچسب مخصوص پلیت .
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید . پایداری پلیت پس از باز کردن کیسه آن ۴ ماه میباشد .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) ممکن است در محلول شستشوی غلیظ کریستال تشکیل شود که این امر مشکلی را ایجاد نمی نماید . قبل از تهیه محلول شستشوی کار، برای حل شدن کریستالها ،
ویال را در ۳۷ در جه سانتی گراد قرار دهید . محلول شستشو را به نسبت ۱/۱۰ با آب مقطر رقیق نمایید ؛ این محلول (آماده مصرف) به مدت یک هفته در شرایط ۲-۸
درجه سانتیگراد قابل نگهداری و مصرف می باشد.
مراحل انجام آزمایش :
۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب کرده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
۲) ۱۰۰ میکرولیتر از کنترل ها و ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه های آماده شده را طبق دستور زیر در چاهک ها بریزید ؛ دو چاهک اول را برای بلانک و کنترل مثبت در نظر
بگیرید . کنترل منفی را به صورت دوپلیکیت ریخته و سایر چاهک ها را برای نمونه ها استفاده کنید ؛ پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت ، چاهکها را
برای مدت ۳۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید .
۳) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید . برای شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان
از سمپلر ۸ کاناله و یا سرنگ استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه
آزمایش گردد . در هر دفعه شستشو حدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای
عملیات شستشو ، چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
۴) ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه آماده مصرف را داخل چاهکها به استثنای چاهک بلانک بریزید ؛ پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت ،
چاهکها را به مدت ۳۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد قرار دهید .
۵) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید ( همانند بند ۳) .
۶) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen (به همه چاهکها اضافه نمایید ؛ چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی قرار دهید .
۷) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده (Solution Stop (به هر چاهک ، واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر چاهک از
دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نموده و جذب نوری چاهکها را قرائت نمایید . توصیه میشود از فیلتر nm 630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد .
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.