محتویات کیت :۱) پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی بادی ضد ۳T) Plate Coated 3T-Anti ).۲) محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme 3T ): یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر محلول حاوی ۳T کنژوگه شده با آنزیم HRP) آماده مصرف) .۳) سری استاندارد (Set Standard (: 6 ویال استاندارد شامل غلظتهای صفر، ۰/۵ , ۱ , ۲/۵ , ۵ و ۱۰ ml/ng از ۳T) هر ویال استاندارد حاوی ۱ میلی لیتر می باشد) .۴) محلول اسی بافر (Buffer Assay ): یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر.۵) سرم کنترل : یک ویال حاوی ۱ میلی لیتر سرم کنترل با غلظت مشخص درج شده بر روی بر چسب ویال .۶) محلول شستشو: یک ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X20 )جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف مقدار لازم از محلول شستشوی غلیظ را به
نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق کنید .۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen): یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر (آماده مصرف) .۸) محلول متوقف کننده (Solution Stop): یک ویال حاوی ۱۲میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .۹) برچسب مخصوص پلیت. شرایط نگهداری :۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری نمایید .۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید .۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .۴) محلول شستشوی آماده مصرف که به نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق شده باشد به مدت یک هفته در شرایط ۸ - ۲ درجه سانتی گراد قابل نگهداری و مصرف می باشد . مراحل انجام آزمایش :۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب نموده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .۲) ۵۰ میکرولیتر از هر استاندارد ، سرم کنترل و نمونه را به داخل هر چاهک بریزید ، پیشنهاد می گردد که از استانداردها و نمونه ها بصورت داپلیکیت استفاده شود بدین
معنی که هر استاندارد و نمونه را در دو چاهک بریزید و در انتها از میانگین جذب نوری آنها برای محاسبه نتایج استفاده کنید، سپس ۵۰ میکرولیترازمحلول اسی بافر
(buffer Assay (را به داخل هر چاهک بریزید .۳) پلیت را برای مدت ۱۵ ثانیه به آرامی تکان دهید تا محتویات چاهکها خوب مخلوط شوند و سپس درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به
مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .۴) ۵۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه را به هر چاهک اضافه نمایید .۵) پلیت را برای مدت ۱۵ ثانیه به آرامی تکان دهید تا محتویات چاهکها خوب مخلوط شوند و سپس درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به
مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .۶) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (برای شستشو میتوان از سمپلر ۸ کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود
که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد ، در هر دفعه شستشوحدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول
شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات شستشو چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی
یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند) .۷) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen (به هر چاهک اضافه نمایید .۸) چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .۹) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول توقف دهنده (Solution Stop (به هر چاهک ادامه واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر چاهک از
دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نمایید (توصیه میشود از فیلتر nm 630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد).
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.