محتویات کیت :
۱) یک پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی بادی ضد ۴T) Plate Coated 4T-Anti ).
۲) محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme (: یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر (آماده مصرف) .
۳) اسی بافر (buffer Assay (: یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر (آماده مصرف) .
۴) سری استانداردها (Set Standards (: 4 ویال استاندارد شامل غلظتهای تقریبی ۱۵ ۲۶/۵، ، ۳۵/۵ و ۴۶ درصد .غلظت دقیق هر استاندارد بر روی ویال استانداردها درج
گردیده است (هر ویال حاوی ۰/۵ میلی لیتر می باشد) .
۵) سرم کنترل : یک ویال حاوی ۰/۵ میلی لیتر سرم کنترل با غلظت مشخص درج شده بر روی برچسب ویال .
۶) محلول شستشو (Solution Wash (: یک ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X 20 ). جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف مقدار لازم از محلول
شستشوی غلیظ را به نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق کنید .
۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen (: یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر (آماده مصرف) .
۸) محلول متوقف کننده (Solution Stop (: یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۹) برچسب مخصوص پلیت .
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) محلول شستشوی آماده مصرف که به نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق شده باشد به مدت یک هفته در شرایط ۲-۸ درجه سانتی گراد قابل نگهداری و مصرف می باشد .
مراحل انجام آزمایش :
۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب نموده و باقی چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید.
۲) ۲۵ میکرولیتر از هر استاندارد ، سرم کنترل و نمونه را به داخل هر چاهک بریزید ، پیشنهاد می گردد که از استانداردها و نمونه ها بصورت داپلیکیت استفاده شود بدین
معنی که هر استاندارد و نمونه را در دو چاهک بریزید و در انتها از میانگین جذب نوری آنها برای محاسبه نتایج استفاده کنید ، سپس ۵۰ میکرولیتر اسی بافر
(Buffer Assay (و در پی آن ۵۰ میکرولیتر آنزیم کنژوگه را در داخل چاهک ها ریخته و برای مدت ۱۵ ثانیه پلیت را تکان دهید تا محتویات چاهکها خوب مخلوط شوند
و آنگاه درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به مدت یک ساعت در درجه حرارت اتاق (-۲۸ ۲۲ درجه سانتی گراد) انکوبه نمایید .
۳) چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (برای شستشو می توان از سمپلر ۸ کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک
به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد ، در هر دفعه شستشو حدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس
چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمائید و در انتهای عملیات شستشو چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا
قطرات اضافی خارج شوند) .
۴) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (substrate Chromogen (به هر چاهک اضافه نمایید و چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .
۵) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده (solution Stop (به هر چاهک ادامه واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر چاهک
از دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نمایید . (توصیه میشود از فیلتر nm 630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد) .
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.