این محصول به منظور رنگ آمیزی در برشهای بافتی formalin fixed, paraffin-embedded با استفاده از روش ایمونوهیستوشیمی کاربرد دارد.
سیستم شناساگر BioVision Poly-HR) به عنوان لایه دوم رنگ آمیزیهای ایمونوهیستوشیمی طراحی و ساخته شده است. این سیستم یک سیستم مبتنی بر HRP و آنتی بادی ثانویه متصل به سیستم پلیمری است و ضمن کاهش سیگنال مزاحم (Background) حساسیت شناسایی آنتی ژن به روش ایمونوهیستوشیمی ایمونوسیتوشیمی را نسبت به روشهای غیر مستقیم رایج چندین برابر افزایش میدهد. این روش رنگ آمیزی همچنین مراحل و مدت زمان رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی ایمونوسیتوشیمی را بسیار کوتاه کرده؛ به طوری که کل مراحل رنگ آمیزی از مرحله اضافه کردن آنتی بادی اولیه تا ظهور سیگنال در مدت زمان حدود ۹۰ دقیقه قابل انجام است از این سیستم میتوان برای شناسایی آنتی بادیهای اولیه با منشا موشی و خرگوشی استفاده نمود. از این محصول میتوان در آزمونهای ایمونوهیستوشیمی – ایمونوسیتوشیمی برای شناسایی آنتی ژنهای سطحی سیتوپلاسمی و یا داخل هسته ای استفاده نمود.
دستورالعمل استفاده :
- برش بافتی را پارافین زدایی و آبدهی کنید.
- بازیابی آنتی ژن را با استفاده از بافر متناسب با بروشور آنتی بادی ( مناسب ) انجام دهید.
- برش بافتی را با بافر TBS ۲ بار و هر بار به مدت ۱۰ دقیقه شستشو دهید.
- پراکسیدازهای آندوژن بافت را با انکوباسیون برش بافتی با H2O2۰/۳ به مدت ۱۵ دقیقه خنثی نمایید.
- برش بافتی را با بافر TBS ۳ بار و هر بار به مدت ۳ دقیقه شستشو دهید.
- آنتی بادی اولیه را به مدت ۴۵ تا ۶۰ دقیقه روی بافت انکوبه کنید مدت زمان انکوباسیون برش بافتی با آنتی بادی اولیه به افینیتی آنتی بادی بستگی دارد مدت زمان بصورت تقریبی ۴۵ تا ۶۰ دقیقه کافی است مدت زمان انکوباسیون برای آنتی بادیهای تولید شده توسط انواع شرکتها باید توسط دستور العمل آن شرکت تعیین شود.
- برش بافتی را مطابق مرحله ۵ شستشو دهید.
- دو قطره از محلول Dual Linker لینکر دوگانه بر روی بافت اضافه کرده و ۳۰ دقیقه انکوبه کنید.
- برش بافتی را مطابق مرحله ۵ شستشو دهید. محلول Poly-HRP آماده مصرف را به بافت اضافه کنید (حدود ۲ قطره بطوریکه بافت را پوشش دهد ( و انکوباسیون را ۴۰ دقیقه ادامه دهید توجه داشته باشید به دلیل حساسیت محلول -Poly HRP به نور انکوباسیون بافتها در این مرحله باید در تاریکی انجام شود
- در طی مدت زمان انکوباسیون بافت با محلول ،Poly-HRP محلول آماده مصرف DAB را تهیه نمایید برای این منظور محلول DAB را با نسبت ۱ به ۲۵ با بافر رقیق کننده DAB رقیق کنید. یک میلی لیتر از محلول آماده مصرف DAB برای حدود ۱۰ برش بافتی کافی است DAB) با نسبت ۱ به ۲۵ مصرف می.شود برای ۱ میلی لیتر محلول آماده به مصرف باید ۴۰ میکرولیتر دب را با ۹۶۰
میکرولیتر با فر رقیق کننده دب مخلوط کنید .) - ۱۲برش بافتی را مطابق مرحله ۵ شستشو دهید.
- محلول آماده مصرف DAB را به مدت ۵ تا ۱۰ دقیقه به برش بافتی اضافه کنید توجه داشته باشید به دلیل حساسیت DAB به ،نور انکوباسیون بافتها با DAB باید در تاریکی انجام شود.
- برش بافتی را با آب مقطر شستشو دهید.
- پس از رنگ آمیزی با هماتوکسیلین اسلاید را با آب جاری شستشو دهید.
- پس از انجام مراحل ،آبگیری اسلاید را مونته کنید.
(طرز تهیهDAB:یک قطره کروموژن،یک سی سی مایع رقیق کننده)
برای مشاهده محصولات پاتولوژی مجموعه نیازطب سلامت به بخش پاتولوژی ایمونوهیستوشیمی و سیتولوژی مراجعه کنید.
ما در پیج اینستاگرام مجموعه نیاز طب سلامت آموزشهای مختلفی در زمینه استفاده از محصولات آزمایشگاهی قرار میدهیم که میتوانید با دنبال کردن پیج از این آموزشها استفاده کنید.