کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب

کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب

ویروس HIV یا ویروس نقص ایمنی اکتسابی از خانواده رتروویروسها می باشد که خود به دو زیر گروه (HIV1 (Type و HIV2 تقسیم می شود. ژنوم این ویروس از نوع RNA تک رشته ای و اندازه آن در حدود 7/9 کیلو باز است. سندرم نقص سیستم ایمنی اکتسابی (AIDS) توسط فعالیت این ویروس در انسان ایجاد می گردد. از نظر پراکندگی HIV1 تقریباً در تمام مناطق جهان یافت می گردد ولی HIV2 بیشتر مختص آفریقای غربی و مناطق محدود دیگری از جهان می شود. میانگین زمان مابین ورود ویروس به بدن تا ظهور علائم بیماری بیش از 8 سال می باشد. این ویروس در طی دوره نهفتگی طولانی مدت خود در بدن با تکثیر و رشد در سیستم ایمنی سلولی و تضعیف آن باعث ایجاد عفونتهای فرصت طلب قارچی، ویروسی و انگلی شده و نهایتاً مرگ بیمار را سبب می شود. جداسازی آنتی بادی اختصاصی تولید شده علیه آنتی ژنهای اختصاصی این ویروس در شناسایی افراد آلوده بسیار حائز اهمیت می باشد. از میان روشهایی که امروزه جهت تشخیص این بیماری کاربرد دارند روش EIA یا الایزا جهت بررسی اولیه و تست غربالگری استفاده می شود، که در واقع از حساسیت بالایی برخوردار می باشد. نمونه های مثبت با این روش با روش تاییدی Western blot مجدداً تست شده و بررسی می گردند. 

اساس آزمایش کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:

اساس آزمایش در این کیت بر روش Immunoassay Enzyme Sandwich Antibody & Antigen Combine استوار می باشد. چاهکهاي پلیت با آنتی ژنهاي نوترکیب 41gp و 120gp مربوط به -1HIV و 36gp مربوط به -2HIV و آنتی بادي اختصاصی -1HIV 24P پوشش داده شده اند، در هنگام آزمایش، پس از افزودن سرم، در صورت وجود آنتی بادیهاي اختصاصی علیه HIV) آنتی بادي هاي IgA-IgG-IgM (از طریق یک Fab به آنتی ژنهاي کف چاهک متصل و از طریق Fab دیگر به آنتی ژنهاي لیبل شده با بیوتین در فاز مایع اتصال می یابند؛ همچنین در صورت وجود آنتی ژن 24P در نمونه این آنتی ژن ازطریق یک سایت آنتی ژنیک به آنتی بادي 24P اختصاصی کوت شده در کف پلیت متصل و از طریق یک سایت آنتی ژنیک دیگر به آنتی بادي 24P لیبل شده با بیوتین در فاز مایع متصل می گردد، در آخر کمپلکس هاي آنتی ژن ساندویچ و آنتی بادي ساندویچ تشکیل می شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول آنزیم کونژوگه که حاوي استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP می باشد به چاهکها اضافه می شود. این استرپتاویدین به بیوتین کمپلکس هاي فوق متصل می شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهکها اضافه می شود. رنگ آبی ایجاد شده بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش می باشد. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکسهاي ایمنی ایجاد شده در چاهکها می باشد . با افزودن محلول متوقف کننده رنگ آبی به زرد تبدیل می شود که بهترین جذب نوري را در طول موج 450 نانومتر دارد . 

محتویات کیت کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:

•  پلیت 96 خانه حاوي چاهکهاي پوشش داده شده با آنتی ژنهاي اختصاصی -1HIV و -2HIV و آنتی بادي اختصاصی -1HIV p24 .
• محلول کونژوگه یک (-1Conj): یک ویال حاوي 0/75 میلی لیتر کونژوگه غلیظ (x20). این محلول را باید با محلول رقیق کننده کونژوگه قبل از مصرف به نسبت 1/20 رقیق نمود .
•  محلول رقیق کننده کونژوگه یک : (Diluent -1Conj ): یک ویال حاوي ml 15محلول جهت رقیق سازي کونژوگه غلیظ .
• محلول کونژوگه دو (-2Conj ): یک ویال حاوي ml 12محلول آماده مصرف استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP .
•  سرم کنترل مثبت آنتی بادي (Control Positive Antibody ): حاوي ml 1 سرم انسانی غیر فعال شده حاوي آنتی بادي علیه -1HIV و -2HIV .
•  سرم کنترل مثبت آنتی ژن (Control Positive Antigen ): حاوي ml 1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی بادیهاي -1HIV و -2HIV حاوي آنتی ژن p24 نوترکیب .
•  سرم کنترل منفی (Control Negative): حاوي ml 1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی ژن p24 وآنتی بادیهاي -1HIV و -2HIV .
• محلول رنگزاي یک مرحله اي (Substrate-Chromogen (: 1 ویال حاوي 12 میلی لیتر محلول رنگزا (آماده براي مصرف) .
•  محلول شستشو (Solution Wash ): دو ویال حاوي 50 میلی لیتر محلول شستشوي غلیظ (X10). جهت تهیه محلول شستشوي آماده مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت 1/10 رقیق نمایید .
•  محلول متوقف کننده (Solution Stop ): یک ویال حاوي12میلی لیتر اسید کلریدریک 1 نرمال .
•  برچسب مخصوص پلیت .

مواد و وسایل مورد نیاز که در کیت موجود نمی باشند :

• دستگاه الایزاریدر با طول موج 450 نانومتر (و در صورت امکان 630 نانومتر به عنوان فیلتر رفرانس) .
•  سمپلرهاي 50 و 100 میکرولیتر دقیق .
• بن ماري یا انکوباتور37 درجه سانتی گراد .
•  محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلول ضد عفونی کننده دیگر .
• آب مقطر .

نکات قابل ذکر براي مصرف کنندگان :

• محتویات این کیت تنها براي مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند .
• این کیت صرفا جهت اندازه گیري24P Antigen و HIV-Anti در سرم و پلاسماي انسانی طراحی و ساخته شده است .
•  از مخلوط کردن محتویات کیتها با شماره ساختهاي مختلف جداً خودداري نمایید .
• کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود آنتی ژنهاي HBs ، HCV و HIV و آنتی بادیهاي HIV و HCV کنترل گردیده و فاقد این عوامل می میباشند.کنترل مثبت آنتی بادي کیت حاوي آنتی بادیهاي HIV و از نظرآنتی ژن HIV غیر فعال شده است. کنترل مثبت آنتی ژن کیت حاوي آنتی ژن p24 نوترکیب می باشد. غیر فعال سازي سرم یا پلاسما بمدت نیم ساعت در 56 درجه سانتی گراد انجام گرفته است؛ جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار میکنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
•  هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکشهاي یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینکهاي آزمایشگاهی هنگام کار با سرمهاي بیماران توصیه می شود .
•  سرمهاي مثبت از نظر آنتی بادیهاي ضد HIV، وسایل و محلولهاي wash مشکوك به آلودگی را بعد از اتمام کار به مدت حداقل 30 دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم %5 یا محلولهاي مناسب ضد عفونی کننده دیگر قرار دهید. همچنین اتوکلاو ، به مدت 20 دقیقه در121درجه سانتی گراد نیز پیشنهاد می گردد .

شرایط نگهداري کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:

• کیت را در یخچال بین دماي 2 تا 8 درجه سانتی گراد نگهداري نمایید .
• چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداري نمایید. پایداري پلیت بعد از باز کردن آن 4 ماه میباشد .
•  پایداري محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء یاد شده بر روي هر یک از آنها می باشد . توصیه میشود بعد از باز کردن کیت حداکثر در فاصله زمانی 4 ماه از آن استفاده نمایید .
•  محلول شستشو را به نسبت10/1 با آب مقطر رقیق نمایید این محلول (آماده مصرف) به مدت یک هفته در شرایط -8 2 درجه سانتیگراد قابل نگهداري و مصرف می باشد .

مراحل انجام آزمایش کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:

• تعداد چاهکهاي مورد نظر را انتخاب نموده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداري پلیت قرار داده و درب آن را ببندید. چاهک اول را به عنوان بلانک انتخاب نموده و در ادامه دو چاهک براي کنترل منفی و یک چاهک براي کنترل مثبت آنتی بادي و یک چاهک جهت کنترل مثبت آنتی ژن در نظر بگیرید .
•  50 میکرولیتر از کنترل منفی، کنترل مثبت و سرمها را به چاهکهاي مورد نظر اضافه نمایید .
•  درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده، سپس به مدت 30 دقیقه در 37 درجه سانتی گراد (بن ماري یا انکوباتور) انکوبه نمایید .
•  100 میکرولیتر محلول کونژوگه یک آماده شده (solution working -1Conj)به همه چاهکها به جز چاهک بلانک اضافه نمایید .
• چاهکها را به مدت 15 ثانیه به ملایمت تکان دهید و درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و سپس به مدت 15 دقیقه در 37 درجه سانتی گراد (بن ماري یا انکوباتور) انکوبه نمایید .
•  محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را 5 بار با محلول شستشوي آماده مصرف بشویید. براي شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می  توان از سمپلر 8 کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد . در هر دفعه شستشو حدود 300 میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهاي عملیات شستشو چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روي یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
• 100میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه - 2 را به داخل کلیه چاهکها به استثناء چاهک بلانک اضافه نمایید .
•  پس از پوشاندن چاهکها توسط بر چسب مخصوص پلیت چاهکها را به مدت 15 دقیقه در37 درجه سانتی گراد انکوبه نمایید .
• محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را 5 بار با محلول شستشوي آماده مصرف بشویید (همانند بند 6) .
• 100میکرولیتر محلول سوبسترا- رنگزا به چاهک اضافه نمایید و بمدت 15 دقیقه در دماي اتاق و تاریکی انکوبه نمایید .
• با اضافه کردن 100 میکرولیتر محلول متوقف کننده به هر چاهک ادامه واکنشهاي آنزیمی را متوقف نمایید. براي سنجش جذب نوري هر چاهک از دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm450 استفاده نمایید و جذب نوري تمامی چاهکها را در مقابل بلانک قرائت نمایید . (توصیه می شود از فیلتر nm630 بعنوان فیلتر رفرانس استفاده شود.)

ارزشیابی آزمایش :

این آزمایش با داشتن شرایط زیر ارزشمند و قابل گزارش تلقی می گردد :

• جذب نوري کمتر از 0/05 براي بلانک، در صورت بیشتر بودن جذب نوري بلانک احتمالاً محلول رنگزا آلوده شده است .
•  میانگین جذب نوري کمتر از 0/1 براي کنترل منفی، در صورت بیشتر بودن این جذب نوري احتمالاً شستشو به طور صحیح صورت نگرفته است، آزمایش را دوباره انجام داده و در مراحل شستشو دقت کنید .
•  میانگین جذب نوري بیشتر از 1/0 براي کنترل هاي مثبت آنتی ژن و آنتی بادي .

 میتوانید کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب با بهترین قیمت از مجموعه نیاز طب سلامت تهیه کنید. علاوه بر این محصول، ما در مجموعه نیاز طب سلامت، کیت های ایمونولوژی و هورمون دیگری هم موجود داریم که با مراجعه به بخش ایمونولوژی و هورمون، میتوانید آنها را بررسی کنید و محصول مورد نظر خود را با بهترین قیمت تهیه کنید.ما در پیج اینستاگرام نیاز طب، تجهیزات آزمایشگاهی مختلفی را مورد بررسی قرار میدهیم. با دنبال کردن این پیج میتوانید اطلاعات خوبی در زمینه تجهیزات آزمایشگاهی کسب کنید.