کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب
ویروس HIV یا ویروس نقص ایمنی اکتسابی از خانواده رتروویروسها می باشد که خود به دو زیر گروه (HIV1 (Type و HIV2 تقسیم می شود. ژنوم این ویروس از نوع RNA تک رشته ای و اندازه آن در حدود ۷/۹ کیلو باز است. سندرم نقص سیستم ایمنی اکتسابی (AIDS) توسط فعالیت این ویروس در انسان ایجاد می گردد. از نظر پراکندگی HIV1 تقریباً در تمام مناطق جهان یافت می گردد ولی HIV2 بیشتر مختص آفریقای غربی و مناطق محدود دیگری از جهان می شود. میانگین زمان مابین ورود ویروس به بدن تا ظهور علائم بیماری بیش از ۸ سال می باشد. این ویروس در طی دوره نهفتگی طولانی مدت خود در بدن با تکثیر و رشد در سیستم ایمنی سلولی و تضعیف آن باعث ایجاد عفونتهای فرصت طلب قارچی، ویروسی و انگلی شده و نهایتاً مرگ بیمار را سبب می شود. جداسازی آنتی بادی اختصاصی تولید شده علیه آنتی ژنهای اختصاصی این ویروس در شناسایی افراد آلوده بسیار حائز اهمیت می باشد. از میان روشهایی که امروزه جهت تشخیص این بیماری کاربرد دارند روش EIA یا الایزا جهت بررسی اولیه و تست غربالگری استفاده می شود، که در واقع از حساسیت بالایی برخوردار می باشد. نمونه های مثبت با این روش با روش تاییدی Western blot مجدداً تست شده و بررسی می گردند.
اساس آزمایش کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:
اساس آزمایش در این کیت بر روش Immunoassay Enzyme Sandwich Antibody & Antigen Combine استوار می باشد. چاهکهای پلیت با آنتی ژنهای نوترکیب ۴۱gp و ۱۲۰gp مربوط به -۱HIV و ۳۶gp مربوط به -۲HIV و آنتی بادی اختصاصی -۱HIV 24P پوشش داده شده اند، در هنگام آزمایش، پس از افزودن سرم، در صورت وجود آنتی بادیهای اختصاصی علیه HIV) آنتی بادی های IgA-IgG-IgM (از طریق یک Fab به آنتی ژنهای کف چاهک متصل و از طریق Fab دیگر به آنتی ژنهای لیبل شده با بیوتین در فاز مایع اتصال می یابند؛ همچنین در صورت وجود آنتی ژن ۲۴P در نمونه این آنتی ژن ازطریق یک سایت آنتی ژنیک به آنتی بادی ۲۴P اختصاصی کوت شده در کف پلیت متصل و از طریق یک سایت آنتی ژنیک دیگر به آنتی بادی ۲۴P لیبل شده با بیوتین در فاز مایع متصل می گردد، در آخر کمپلکس های آنتی ژن ساندویچ و آنتی بادی ساندویچ تشکیل می شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول آنزیم کونژوگه که حاوی استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP می باشد به چاهکها اضافه می شود. این استرپتاویدین به بیوتین کمپلکس های فوق متصل می شود. پس از انکوباسیون و شستشو، محلول سوبسترا و کروموژن به چاهکها اضافه می شود. رنگ آبی ایجاد شده بعد از این مرحله نتیجه تجزیه سوبسترا در اثر فعالیت آنزیم و تغییر رنگ محلول کروموژن ناشی از این واکنش می باشد. شدت این رنگ متناسب با تعداد کمپلکسهای ایمنی ایجاد شده در چاهکها می باشد . با افزودن محلول متوقف کننده رنگ آبی به زرد تبدیل می شود که بهترین جذب نوری را در طول موج ۴۵۰ نانومتر دارد .
محتویات کیت کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:
- پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی ژنهای اختصاصی -۱HIV و -۲HIV و آنتی بادی اختصاصی -۱HIV p24 .
- محلول کونژوگه یک (-۱Conj): یک ویال حاوی ۰/۷۵ میلی لیتر کونژوگه غلیظ (x20). این محلول را باید با محلول رقیق کننده کونژوگه قبل از مصرف به نسبت ۱/۲۰ رقیق نمود .
- محلول رقیق کننده کونژوگه یک : (Diluent -1Conj ): یک ویال حاوی ml 15محلول جهت رقیق سازی کونژوگه غلیظ .
- محلول کونژوگه دو (-۲Conj ): یک ویال حاوی ml 12محلول آماده مصرف استرپتاویدین لیبل شده با آنزیم HRP .
- سرم کنترل مثبت آنتی بادی (Control Positive Antibody ): حاوی ml 1 سرم انسانی غیر فعال شده حاوی آنتی بادی علیه -۱HIV و -۲HIV .
- سرم کنترل مثبت آنتی ژن (Control Positive Antigen ): حاوی ml 1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی بادیهای -۱HIV و -۲HIV حاوی آنتی ژن p24 نوترکیب .
- سرم کنترل منفی (Control Negative): حاوی ml 1 سرم انسانی منفی از نظر آنتی ژن p24 وآنتی بادیهای -۱HIV و -۲HIV .
- محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen (: 1 ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر محلول رنگزا (آماده برای مصرف) .
- محلول شستشو (Solution Wash ): دو ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X10). جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت ۱/۱۰ رقیق نمایید .
- محلول متوقف کننده (Solution Stop ): یک ویال حاوی۱۲میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
- برچسب مخصوص پلیت .
مواد و وسایل مورد نیاز که در کیت موجود نمی باشند :
- دستگاه الایزاریدر با طول موج ۴۵۰ نانومتر (و در صورت امکان ۶۳۰ نانومتر به عنوان فیلتر رفرانس) .
- سمپلرهای ۵۰ و ۱۰۰ میکرولیتر دقیق .
- بن ماری یا انکوباتور۳۷ درجه سانتی گراد .
- محلول هیپوکلریت سدیم %۵ یا محلول ضد عفونی کننده دیگر .
- آب مقطر .
نکات قابل ذکر برای مصرف کنندگان :
- محتویات این کیت تنها برای مصرف در همین کیت قابل استفاده هستند .
- این کیت صرفا جهت اندازه گیری۲۴P Antigen و HIV-Anti در سرم و پلاسمای انسانی طراحی و ساخته شده است .
- از مخلوط کردن محتویات کیتها با شماره ساختهای مختلف جداً خودداری نمایید .
- کلیه مواد موجود در کیت که منشاء سرمی دارند از نظر وجود آنتی ژنهای HBs ، HCV و HIV و آنتی بادیهای HIV و HCV کنترل گردیده و فاقد این عوامل می میباشند.کنترل مثبت آنتی بادی کیت حاوی آنتی بادیهای HIV و از نظرآنتی ژن HIV غیر فعال شده است. کنترل مثبت آنتی ژن کیت حاوی آنتی ژن p24 نوترکیب می باشد. غیر فعال سازی سرم یا پلاسما بمدت نیم ساعت در ۵۶ درجه سانتی گراد انجام گرفته است؛ جهت احتیاط بهتر است کاربرانی که با کیت کار میکنند از تماس مستقیم با مواد بپرهیزند .
- هنگام انجام آزمایش حتماً از دستکشهای یکبار مصرف استفاده کنید. همچنین استفاده از عینکهای آزمایشگاهی هنگام کار با سرمهای بیماران توصیه می شود .
- سرمهای مثبت از نظر آنتی بادیهای ضد HIV، وسایل و محلولهای wash مشکوک به آلودگی را بعد از اتمام کار به مدت حداقل ۳۰ دقیقه در مجاورت محلول هیپوکلریت سدیم %۵ یا محلولهای مناسب ضد عفونی کننده دیگر قرار دهید. همچنین اتوکلاو ، به مدت ۲۰ دقیقه در۱۲۱درجه سانتی گراد نیز پیشنهاد می گردد .
شرایط نگهداری کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:
- کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
- چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید. پایداری پلیت بعد از باز کردن آن ۴ ماه میباشد .
- پایداری محتویات کیت (قبل از باز شدن درب کیت) تا پایان مدت انقضاء یاد شده بر روی هر یک از آنها می باشد . توصیه میشود بعد از باز کردن کیت حداکثر در فاصله زمانی ۴ ماه از آن استفاده نمایید .
- محلول شستشو را به نسبت۱۰/۱ با آب مقطر رقیق نمایید این محلول (آماده مصرف) به مدت یک هفته در شرایط -۸ ۲ درجه سانتیگراد قابل نگهداری و مصرف
می باشد .
مراحل انجام آزمایش کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب:
- تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب نموده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید. چاهک اول را به عنوان بلانک انتخاب نموده و در ادامه دو چاهک برای کنترل منفی و یک چاهک برای کنترل مثبت آنتی بادی و یک چاهک جهت کنترل مثبت آنتی ژن در نظر بگیرید .
- ۵۰ میکرولیتر از کنترل منفی، کنترل مثبت و سرمها را به چاهکهای مورد نظر اضافه نمایید .
- درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده، سپس به مدت ۳۰ دقیقه در ۳۷ درجه سانتی گراد (بن ماری یا انکوباتور) انکوبه نمایید .
- ۱۰۰ میکرولیتر محلول کونژوگه یک آماده شده (solution working -1Conj)به همه چاهکها به جز چاهک بلانک اضافه نمایید .
- چاهکها را به مدت ۱۵ ثانیه به ملایمت تکان دهید و درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و سپس به مدت ۱۵ دقیقه در ۳۷ درجه سانتی گراد (بن ماری یا انکوباتور) انکوبه نمایید .
- محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید. برای شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان از سمپلر ۸ کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد . در هر دفعه شستشو حدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات شستشو چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
- ۱۰۰میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه – ۲ را به داخل کلیه چاهکها به استثناء چاهک بلانک اضافه نمایید .
- پس از پوشاندن چاهکها توسط بر چسب مخصوص پلیت چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه نمایید .
- محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (همانند بند ۶) .
- ۱۰۰میکرولیتر محلول سوبسترا- رنگزا به چاهک اضافه نمایید و بمدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق و تاریکی انکوبه نمایید .
- با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده به هر چاهک ادامه واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید. برای سنجش جذب نوری هر چاهک از دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm450 استفاده نمایید و جذب نوری تمامی چاهکها را در مقابل بلانک قرائت نمایید . (توصیه می شود از فیلتر nm630 بعنوان فیلتر رفرانس استفاده شود.)
ارزشیابی آزمایش :
این آزمایش با داشتن شرایط زیر ارزشمند و قابل گزارش تلقی می گردد :
- جذب نوری کمتر از ۰/۰۵ برای بلانک، در صورت بیشتر بودن جذب نوری بلانک احتمالاً محلول رنگزا آلوده شده است .
- میانگین جذب نوری کمتر از ۰/۱ برای کنترل منفی، در صورت بیشتر بودن این جذب نوری احتمالاً شستشو به طور صحیح صورت نگرفته است، آزمایش را دوباره انجام داده و در مراحل شستشو دقت کنید .
- میانگین جذب نوری بیشتر از ۱/۰ برای کنترل های مثبت آنتی ژن و آنتی بادی .
میتوانید کیت الایزای HIV 1/2 Ag-Ab پیشتازطب با بهترین قیمت از مجموعه نیاز طب سلامت تهیه کنید. علاوه بر این محصول، ما در مجموعه نیاز طب سلامت، کیت های ایمونولوژی و هورمون دیگری هم موجود داریم که با مراجعه به بخش ایمونولوژی و هورمون، میتوانید آنها را بررسی کنید و محصول مورد نظر خود را با بهترین قیمت تهیه کنید.
ما در پیج اینستاگرام نیاز طب، تجهیزات آزمایشگاهی مختلفی را مورد بررسی قرار میدهیم. با دنبال کردن این پیج میتوانید اطلاعات خوبی در زمینه تجهیزات آزمایشگاهی کسب کنید.
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.