دستورالعمل استفاده آنتی بادی PSA بایوتک:
نکات مهم در رنگ آمیزی به روش دستی :
- از روش (HIRE (Retrieval Epitope Induced-Heat در ۹=PH بمدت ۳۰-۱۰ دقیقه استفاده شود. مدت زمان بازیافت آنتی ژن بسته به مدت زمان فیکس شدن بافت متفاوت است و الزم است
هر آزمایشگاه این مدت زمان را بهینه نماید. - در محلول بالکینگ پراکسیداز بمدت ۵ تا ۱۰ دقیقه در دمای محیط بالک شود )اگر از سیستم آلکالین فسفاتاز استفاده می شود این مرحله نیاز نیست(.
- از آنتی بادی اولیه غلیظ در رقت۱:۱۰۰ تا ۱:۲۰۰ بمدت ۳۰ تا ۴۵ دقیقه در دمای محیط استفاده کنید )در صورتی که آنتی بادی از نوع آماده مصرف use to ready باشد از رقیق نمودن آن اجتناب
کنبد و آن را به همان صورت دریافت شده مصرف نمایید(. رقت و مدت زمان انکوباسیون برش بافت با آنتی بادیها به افینیتی آنتی بادی، نوع آنتی بادی ثانویه و سیستم رنگ آمیزی بستگی دارد. لذا
این متغیرها می بایست در هر آزمایشگاه بهینه شود. - آنتی بادی ثانویه بمدت ۴۵-۳۰ دقیقه در دمای محیط انکوبه شود )بسته به نوع کیت که تک مرحله یا ۲ مرحله باشد زمان متغیر است (.
- از سوبسترای DAB یا Red Fast بمدت ۱۵-۵ دقیقه در دمای محیط استفاده شود.
- اسالید را با هماتوکسین رنگ آمیزی و پس از شستشو با آب مقطر، با محلول blueing بمدت ۳۰ ثانیه مجاور شود.
- پس از خشک شدن اسالید، المل روی آن قرار گرفته شود.
روش رنگ آمیزی پیشنهادی در دستگاه های اتوماتیک :
-نکات مهم در روش رنگ آمیزی با سیستم خودکار )اتوماتیک( با دستگاه ULTRA BenchMark Ventana
- رقت پیشنهادی آنتی بادی ۱:۳۰ تا ۱:۶۰ است.
- از کیت IHC DAB View Ultra استفاده نمائید.
- پروتکل مرحله اول ۳۲ تا ۶۴ دقیقه در دمای ۱۰۰ درجه سانتیگراد.
- آنتی بادی اولیه به مدت ۳۲ دقیقه در دمای ۳۶ درجه سانتیگراد استفاده شود.
-نکات مهم در روش رنگ آمیزی با دستگاه Autostainer MAX-BOND’ Biosystems Leica
- زمان Incubation Marker بمدت ۳۰ دقیقه انجام گیرد.
- روش (HIER (retrieval epitope induced-Heat با استفاده از محلول ER Bond بمدت ۲ تا ۳۰ دقیقه انجام گیرد.
هشدارها و اقدامات احتیاطی:
- اطمینان حاصل کنید که از روش های مناسب کار با معرف پیروی می کنید. همیشه از روپوش آزمایشگاهی ، دستکش یکبار مصرف و سایر تجهیزات حفاظت فردی مناسب استفاده کنید.
- از خوردن آنتی بادی پرهیز کنید و از تماس آن با چشم و سایر غشاهای مخاطی خودداری کنید. در صورت هر گونه تماس با آنتی بادی ناحیه را با مقدار زیادی آب بشویید.
- برای اطمینان از پایداری آنتی بادی و دقت نتایج، اطمینان حاصل کنید که آنتی بادی با میکروب ها آلوده نشود برای اینکار الزم است از وسایل استریل استفاده نمائید.
- در حین کار با آنتی بادی آن را برای زمان طوالنی در مجاورت دمای محیط قرار ندهید و بالفاصله پس از استفاده آن را به یخچال منتقل نمائید.
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.