محتویات کیت :
۱) پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی ژنهای ویروس سرخجه (plate coated Rubella ).
۲) محلول رقیق کننده نمونه (Diluent Sample (: دو ویال هر یک حاوی۵۰ میلی لیتر محلول جهت رقیق کردن نمونه ها .
۳) محلول آنزیم کنژوگه آماده مصرف (Conjugate Enzyme ): یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر آنتی بادی ضد IgG انسانی متصل شده به آنزیم پراکسیداز .
۴) استانداردها (set Standards (: 5 ویال استاندارد شامل غلظت های صفر , ۱۰ , ۵۰ , ۱۰۰ , ۲۰۰ ml/IU از آنتی بادی ضد ویروس سرخجه از نوع IgG ، کالیبره شده
در مقابل استانداردهای مرجع WHO .) استانداردهای صفر و ۱۰ حاوی ۲ میلی لیتر و سایر استانداردها حاوی ۱/۵ میلی لیتر می باشند) .
۵) سرم کنترل (Serum Control): یک ویال شامل ۱/۵ میلی لیتر سرم حاوی IgG علیه Rub با غلظت مشخص درج شده بر روی برچسب ویال .
۶) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate – Chromogen ): یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر تترا متیل بنزیدین و آب اکسیژنه (آماده برای مصرف) .
۷) محلول شستشو (Buffer Wash ): یک ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X20 (دارای محلول بافر فسفات و %۰/۰۵ توئین . جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف ، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت ۱/۲۰ رقیق نمایید .
۸) محلول متوقف کننده (Solution Stop ): یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۹) برچسب مخصوص پلیت .
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید . پایداری پلیت پس از باز کردن کیسه آن ۴ ماه میباشد .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) محلول شستشوی آماده مصرف که به نسبت ۱/۲۰ رقیق شده باشد به مدت یک هفته در شرایط ۸ – ۲ درجه سانتی گراد قابل نگهداری و مصرف می باشد .
مراحل انجام آزمایش :
۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب کرده و بقیه چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
۲) نمونه ها را با کمک محلول رقیق کننده نمونه به نسبت ۱ به ۱۰۱ رقیق کنید ( ۱۰ میکرولیتر نمونه با ۱ میلی لیتر محلول رقیق کننده نمونه) .
توجه : استانداردها و کنترل کیت آماده مصرف بوده و نیازی به رقیق سازی ندارند .
۳) ۱۰۰ میکرولیتر از استانداردها ، سرم کنترل و نمونه های رقیق شده را به ترتیب در چاهک ها بریزید ، پیشنهاد میگردد که از استانداردها و نمونه ها به صـورت داپلیکیـت
استفاده شود بدین معنی که هر استاندارد و نمونه را در دو چاهک بریزید و در انتها از میانگین جذب نوری آنها برای محاسبه نتایج استفاده کنید .
۴) پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت ، چاهکها را برای مدت ۳۰ دقیقه در دمای اتاق (۲۸ – ۲۲ درجه سانتی گراد) انکوبه کنید .
۵) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید . برای شستشو چنانچه دستگاه واشر اتوماتیک در دسترس نباشد می توان از
سمپلر ۸ کاناله و یا سرنگ استفاده نمود ولی باید مواظب بود که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش
گردد . در هر دفعه شستشو حدود۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات
شستشو ، چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند .
۶) ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه آماده مصرف را داخل چاهکها بریزید .
۷) پس از پوشاندن چاهکها توسط برچسب مخصوص پلیت ، چاهکها را به مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق (۲۸ – ۲۲ درجه سانتی گراد) انکوبه نمایید .
۸) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (همانند بند ۵) .
۹) ۱۰۰میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen )به چاهکها اضافه نمایید .
۱۰) چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .
۱۱) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده (Solution Stop (به هر چاهک ، ادامه واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر
چاهک از دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نموده و جذب نوری چاهکها را قرائت نمایید . توصیه میشود از فیلتر nm630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد.
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.