محتویات کیت :
۱) پلیت ۹۶ خانه حاوی چاهکهای پوشش داده شده با آنتی بادی ضد ۳T) Plate Coated 3T-Anti ).
۲) محلول آنزیم کنژوگه (Conjugate Enzyme 3T ): یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر محلول حاوی ۳T کنژوگه شده با آنزیم HRP) آماده مصرف) .
۳) سری استاندارد (Set Standard (: 6 ویال استاندارد شامل غلظتهای صفر، ۰/۵ , ۱ , ۲/۵ , ۵ و ۱۰ ml/ng از ۳T) هر ویال استاندارد حاوی ۱ میلی لیتر می باشد) .
۴) محلول اسی بافر (Buffer Assay ): یک ویال حاوی ۶ میلی لیتر.
۵) سرم کنترل : یک ویال حاوی ۱ میلی لیتر سرم کنترل با غلظت مشخص درج شده بر روی بر چسب ویال .
۶) محلول شستشو: یک ویال حاوی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشوی غلیظ (X20 )جهت تهیه محلول شستشوی آماده مصرف مقدار لازم از محلول شستشوی غلیظ را به
نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق کنید .
۷) محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen): یک ویال حاوی ۱۲ میلی لیتر (آماده مصرف) .
۸) محلول متوقف کننده (Solution Stop): یک ویال حاوی ۱۲میلی لیتر اسید کلریدریک ۱ نرمال .
۹) برچسب مخصوص پلیت.
شرایط نگهداری :
۱) کیت را در یخچال بین دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری نمایید .
۲) چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت همراه با نمگیر نگهداری نمایید .
۳) پایداری محتویات کیت تا پایان مدت انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آنها می باشد .
۴) محلول شستشوی آماده مصرف که به نسبت ۱/۲۰ با آب مقطر رقیق شده باشد به مدت یک هفته در شرایط ۸ – ۲ درجه سانتی گراد قابل نگهداری و مصرف می باشد .
مراحل انجام آزمایش :
۱) تعداد چاهکهای مورد نظر را انتخاب نموده و سایر چاهکها را به همراه نمگیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
۲) ۵۰ میکرولیتر از هر استاندارد ، سرم کنترل و نمونه را به داخل هر چاهک بریزید ، پیشنهاد می گردد که از استانداردها و نمونه ها بصورت داپلیکیت استفاده شود بدین
معنی که هر استاندارد و نمونه را در دو چاهک بریزید و در انتها از میانگین جذب نوری آنها برای محاسبه نتایج استفاده کنید، سپس ۵۰ میکرولیترازمحلول اسی بافر
(buffer Assay (را به داخل هر چاهک بریزید .
۳) پلیت را برای مدت ۱۵ ثانیه به آرامی تکان دهید تا محتویات چاهکها خوب مخلوط شوند و سپس درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به
مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .
۴) ۵۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کنژوگه را به هر چاهک اضافه نمایید .
۵) پلیت را برای مدت ۱۵ ثانیه به آرامی تکان دهید تا محتویات چاهکها خوب مخلوط شوند و سپس درب چاهکها را با برچسب مخصوص پلیت پوشانده و چاهکها را به
مدت ۳۰ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .
۶) محتویات چاهکها را خالی کرده و چاهکها را ۵ بار با محلول شستشوی آماده مصرف بشویید (برای شستشو میتوان از سمپلر ۸ کاناله استفاده نمود ولی باید مواظب بود
که محلول شستشو از یک چاهک به چاهک دیگر وارد نشود زیرا می تواند موجب ایجاد خطا در نتیجه آزمایش گردد ، در هر دفعه شستشوحدود ۳۰۰ میکرولیتر محلول
شستشو در هر چاهک ریخته و سپس چاهک ها را با وارونه کردن و تکاندن خالی نمایید و در انتهای عملیات شستشو چاهکها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم بر روی
یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی خارج شوند) .
۷) ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا (Substrate-Chromogen (به هر چاهک اضافه نمایید .
۸) چاهکها را به مدت ۱۵ دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی انکوبه نمایید .
۹) با اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول توقف دهنده (Solution Stop (به هر چاهک ادامه واکنشهای آنزیمی را متوقف نمایید . برای سنجش جذب نوری هر چاهک از
دستگاه الایزاریدر با فیلتر nm 450 استفاده نمایید (توصیه میشود از فیلتر nm 630 به عنوان فیلتر رفرانس استفاده گردد).
نقد و بررسیها
Clear filtersهنوز بررسیای ثبت نشده است.