تجهیزات آزمایشگاهی
دستگاه ها
نو
دیوار نیاز طب
مصرفی عمومی آزمایشگاه
مصرفی مراکز درمانی
ایمونولوژی و هورمون
پاتولوژی ایمونوهیستوشیمی و سیتولوژی
بیوشیمی
هماتولوژی و میکروب و سرولوژی
مواد شیمیایی
ایمونوسیتوشیمی (ICC)، ایمونوهیستوشیمی (IHC) و ایمونوفلورسانس (IF) همگی از آنتی بادی ها برای ارائه جزئیات بصری در مورد فراوانی، توزیع و محلی سازی پروتئین استفاده می کنند. این اصطلاحات اغلب گیج کننده هستند و گاهی به اشتباه به جای یکدیگر استفاده می شوند. بنابراین، درک تفاوت های اساسی بین این تکنیک های مختلف مهم است.
IHC-Fr (سمت چپ):
Cadherin-17 با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال خرگوش ضد موش Cadherin-17 (کاتالوگ # MAB8524) و به دنبال آن آنتی بادی ثانویه ضد خرگوش IgG کونژوگه NorthernLights™ ۵۵۷ در بخش‌های منجمد فیکس شده روده موش شناسایی شد. (قرمز؛ کاتالوگ # NL004) و با DAPI (آبی) رنگ آمیزی شده است. رنگ آمیزی اختصاصی Cadherin-17 به غشای پلاسمایی موضعی شد.
ICC/IF (راست):
E-Cadherin در رده سلول های بنیادی جنینی D3 موش ثابت غوطه وری با استفاده از آنتی بادی پلی کلونال آنتی ژن E-Cadherin بز ضد موش (کاتالوگ # AF748) با غلظت ۱۰ میکروگرم در میلی لیتر به مدت ۳ ساعت در دمای اتاق شناسایی شد. سلول ها با استفاده از آنتی بادی ثانویه ضد IgG بز کونژوگه با NorthernLights™ ۵۵۷ (قرمز؛ کاتالوگ # NL001) رنگ آمیزی شدند و با DAPI (آبی) رنگ آمیزی شدند. رنگ آمیزی خاص به سطوح سلولی محلی شد.
چه نمونه هایی در ICC در مقابل IHC استفاده می شود؟
نوع نمونه و آماده سازی – بافت در مقابل سلول – همانطور که از نام پیداست، تشخیص IHC به رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی بافتی از بافت پارافین تثبیت شده با فرمالین (FFPE) یا بافت منجمد اشاره دارد. ICC به رنگ‌آمیزی سلول‌های دست‌نخورده جدا شده یا کشت‌شده اشاره دارد که در آن نمونه‌ها ممکن است از رده‌های سلولی کشت بافت، چسبنده یا در حالت تعلیق باشند. قبل از رنگ‌آمیزی، نمونه‌های IHC و ICC نیز متفاوت پردازش می‌شوند. چند تفاوت کلیدی بین برنامه ها عبارتند از:
- برای رنگ‌آمیزی IHC، نمونه‌ها یا در پارافین قرار می‌گیرند یا منجمد می‌شوند تا مورفولوژی بافت حفظ شود. رنگ آمیزی ICC شامل تشخیص تک تک سلول ها است.
- نمونه های ICC، در مقایسه با IHC، دوره تثبیت کوتاه تری را پشت سر می گذارند.
- فیکساتورها، مانند فرمالدئید، می توانند اپی توپ ها را بپوشانند و اتصال آنتی ژن به آنتی بادی را کاهش دهند. یک روش بازیابی آنتی ژن معمولاً قبل از شروع رنگ‌آمیزی IHC برای بازیابی آنتی‌ژنیت بافت گنجانده می‌شود. بازیابی اپی توپ ناشی از حرارت (HIER) یا بازیابی اپی توپ ناشی از پروتئولیتیک (PIER) برای IHC مورد نیاز است. IHC اغلب نیاز به مسدود کردن اپی توپ های اتصال غیر اختصاصی در طول آماده سازی نمونه دارد.
چه روش های برچسب گذاری برای ICC و IHC بهترین هستند؟
روش برچسب گذاری – کروموژنیک در مقابل فلورسنت – IHC و ICC به طور سنتی از معرف های کروموژنیک برای شناسایی آنتی ژن های هدف استفاده می کنند. در تشخیص کروموژنیک، آنزیمی مانند پراکسیداز (HRP) یک سوبسترای محلول شامل ۳,۳′-Diaminobenzidine (DAB) و ۳-amino-9-ethylcarbazole (AEC) را به یک محصول رنگی نامحلول در محل آنتی ژن تبدیل می کند. در تشخیص IF، معرف فلوئوروکروم، به طور مستقیم یا غیرمستقیم، آنتی‌بادی اولیه را برچسب‌گذاری می‌کند و پس از برانگیختگی، نور را در طول موج خاصی ساطع می‌کند.
با فهرست گسترده ای از برچسب های فلورسنت موجود و سهولت استفاده از آنها در کاربردهای چندگانه، محققان ICC/IF و فلورسنت IHC را به طور منظم انتخاب می کنند. علاوه بر این، استفاده از آنتی بادی‌های کونژوگه فلورسنت خاص علیه نشانگرهای اندامک، تجزیه و تحلیل پروتئین‌های مورد نظر را تسهیل می‌کند و قابلیت‌های چندگانه را در IHC و ICC گسترش می‌دهد. برای مقایسه جامع روش‌های تشخیص کروموژنیک و فلورسانس، راهنمای تشخیص IHC را مرور کنید.
آنتی بادی تیروزین هیدروکسیلاز در بخش بافت FFPE مغز انسان / ماده سیاه با آنتی بادی مونوکلونال تیروزین هیدروکسیلاز موش (۵C7.2E8) [NBP2-42211] در غلظت ۱۵ میکروگرم در میلی لیتر شناسایی شد. بافت، ایمونوهیستوشیمی قوی نورون های مثبت تیروزین هیدروکسیلاز را نشان می دهد.
سیناپتوفیزین در بخش‌های منجمد پرفیوژن هیپوکامپ مغز موش با آنتی‌بادی مونوکلونال سیناپتوفیزین ضد انسانی موش (MAB5555) با غلظت ۱۵ میکروگرم بر میلی‌لیتر شناسایی شد. (قرمز) بافت با استفاده از آنتی بادی ثانویه ضد موش IgG 557 کونژوگه NorthernLights (کاتالوگ NL007) رنگ آمیزی شد. هسته ها با DAPI (آبی) رنگ آمیزی شدند. رنگ آمیزی سیناپتوفیزین در سیتوپلاسم و هسته وجود دارد.
ممنونیم که تا آخر این مقاله با ما همراه بودید. امیدواریم توانسته باشیم طی این مقاله شما را با تفاوت بین ایمونوسیتوشیمی (ICC)، ایمونوهیستوشیمی (IHC) و ایمونوفلورسانس (IF) آشنا کنیم.
می‌توانید برای کسب اطلاعات بیشتر درباره آنتی بادی های ایمونوهیستوشیمی به صفحه پاتولوژی ایمونوهیستوشیمی و سیتولوژی مراجعه کنید.را مطالعه کنید. در این مقاله به بررسی کامل تجهیزات آزمایشگاهی پرداخته‌ایم.
منبع:
https://www.novusbio.com/
محقق و مترجم:لیلا شریعتی